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PROUCTS LIST
德國 ChromoTek 公司成立于2008年,致力于細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研發(fā)與研究,公司擁有強大的研發(fā)團隊,有先進(jìn)的生物制劑,主要主要使命是花費較少的時間和成本,使客戶獲得得高質(zhì)量的實驗數(shù)據(jù)。
ChromoTek的產(chǎn)品分類:
一、Nano-Trap系列;以產(chǎn)品結(jié)合物為標(biāo)準(zhǔn),包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列,還有96板系列;抗體結(jié)合物包括GFP Trap,RFP Trap,GST Trap,Dnmt1-Trap;Mk2-Trap;P53-Trap;Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列;含GFP booster RFP booster;
三、 可用于HCA 實驗的Chromobodies(質(zhì)?;蚣?xì)胞系形式);
四、 高品質(zhì)抗體(標(biāo)簽蛋白抗體和普通抗體)
Chromotek —源于羊駝的納米抗體
SPRING
由一個重鏈可變區(qū)組成的羊駝單域抗體,是目前可以得到的具 有完整功能的穩(wěn)定的可結(jié)合抗原的小單位。分子量僅15 kDa,是 常規(guī)IgG抗體分子量的1 /10。
羊駝重鏈抗體	Nanobody/VHH
SPRING
分子量小
»分子量僅15 kDa,是傳統(tǒng)IgG抗體(150 kDa)的1 /10,或Fab片段(50 kDa)的1/3
»結(jié)構(gòu)簡單穩(wěn)定,僅一個重鏈可變區(qū),特異性強
應(yīng)用廣泛
»免疫沉淀、免疫熒光、超分辨率成像、表面等離子體共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)、 switchSENSE 技術(shù)等
穏定性高
»熱穩(wěn)定性高,可常溫運輸
»化學(xué)穩(wěn)定性高,可忍受苛刻的緩沖及洗脫條件
多重驗證
»序列明確,結(jié)構(gòu)清晰
»應(yīng)用驗證
» SCI文獻(xiàn)引用
親和力高
»表位結(jié)合能力強,不受空間環(huán)境影響
»更高的組織穿透力
Chromotek精品系列
SPRING
Y Nano-Traps
GFP-Trap —免疫沉淀伴侶
產(chǎn)品特色:
»結(jié)構(gòu)穩(wěn)定——不會斷裂,無普通抗體輕鏈與重鏈污染
»性質(zhì)穩(wěn)定——耐高溫,耐苛刻的孵育條件和洗脫條件
»親和力高——抓捕牢固不易脫落,可顯著縮短反應(yīng)時間
應(yīng)用領(lǐng)域:
» Immunoprecipitation (IP) / Co-IP
» Mass spectrometry (MS)
» Enzyme activity measurements
» ChIP, RIP, iCLIP 分析
識別GFP衍生物:
» AcGFP, Clover, eGFP, Emerald, GFP, GFP5, GFP Envy
GFP S65T, mGFP, mPhluorin, PA-GFP, Superfolder
GFP, TagGFP, TagGFP2, monomeric eGFP K206A
» YFP, Citrine, eCitrine, eYFP, Venus, Ypet
» CFP
» BFP
▲ GFP-Trap在免疫沉淀中抓取蛋白*
I: Input, FT: flow through (non-bound),
B: bound
GFP-Trap2400+篇SCI文獻(xiàn)引用,免疫沉淀實驗的金標(biāo)準(zhǔn)
Y Spot-Tag®
Spot-Tag® (序列PDRVRAVSHWSS)是基于Spot納米抗體的優(yōu)化試劑,用于多種捕獲和檢 測應(yīng)用中。
優(yōu)勢
»通用肽標(biāo)簽,適用范圍廣泛
»針對內(nèi)源水平的標(biāo)簽蛋白進(jìn)行了優(yōu)化
»納米抗體技術(shù)實現(xiàn)高性能
Spot-Tag : PDRVRAVSHWSS
t t t t
Screened and mutated positions
應(yīng)用
IP/Co-IP: Spot-Trap®
•單帶純化:下游應(yīng)用中無輕鏈和重鏈
•高親和力,N端或C端融合的解離常數(shù)KD低至6-7 nM
• 65°C高穩(wěn)定性,可耐pH范圍4-10
•樹脂的結(jié)合能力2 1.4mg /ml (對于30 kDa的蛋白質(zhì))
IF/ WB: Spot-Label
偶聯(lián)ATTO594的抗Spot-Tag期米抗體
•更小的連接誤差,更好的組織穿透力
•成像性能優(yōu)異
-用于WB極度敏感
Protein purification: Spot-Cap
基于期米抗體的親和樹脂
•一步法純化蛋白
Y Nano-Boosters/Nano-Labels
SPRING
Nano-Boosters & Nano-Labels是一類熒光探針,通過將靶標(biāo)蛋白的羊駝單域抗體VhH與熒光染料偶 聯(lián)在一起,Nano-Boosters能夠增強GFP、RFP等熒光蛋白的信號強度,Nano-Labels則能夠更準(zhǔn)確的定 位到靶標(biāo)蛋白位置。
優(yōu)勢
»增強熒光信號,成像效果更出眾
»熒光基團位移偏差小,定位更準(zhǔn)確
»結(jié)構(gòu)小巧且穩(wěn)定,通透性更佳
應(yīng)用
»免疫熒光(IF)
»免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)
»免疫組織化學(xué)(IHC)
»組織透明三維成像(DISC。)
»超分辨顯微成像(SPM)
產(chǎn)品一覽
SPRING
Y Nano-Caps
SPRING
Nano-Caps是納米抗體/VhH偶聯(lián)的瓊脂糖珠,可以高效的進(jìn)行一步法純化蛋白。
優(yōu)勢
» 一步法純化蛋白
»高結(jié)合力
»可重復(fù)使用
»洗脫溫和
應(yīng)用
»蛋白純化
Y Chromobodies®
SPRING
Chromobodies®是一種熒光納米探針,通過將羊駝單域抗體VhH與熒光蛋白的基因序列融合在一個重組 質(zhì)粒來實現(xiàn)內(nèi)源性靶標(biāo)蛋白在活細(xì)胞內(nèi)的可視化和實時分析。
優(yōu)勢
»結(jié)枸小巧穩(wěn)定,易于轉(zhuǎn)化表達(dá)
»活細(xì)胞成像,內(nèi)源性靶標(biāo)實時分析
»超分辨顯微成像,高通量分析
»不干擾內(nèi)源性靶標(biāo)蛋白功能
應(yīng)用
»高通量分析(HCA)
»免疫熒光(IF)
»活細(xì)胞成像(Live cell)
»超分辨顯微成像(SPM)
?
產(chǎn)品一覽
SPRING
Chromotek產(chǎn)品疑難解析
SPRING
Nanobodies / VhHs
GFP VhH 是否結(jié)合 protein A 或者 protein G ?
GFP VhH 結(jié)合 protein A 但不結(jié)合 protein Go
Nano-Traps
GFP-Trap®對于N端GFP融合管白和C端GFP融合蛋白在親和力上是否有差別?
GFP-Trap®對于C端GFP融合蛋白有稍微更高的親和力??梢酝ㄟ^延長孵育時間(15-30min延長至l-2h)來補償這個差別。
能否用GFP-Trap®直接從組織樣品(例如位于變性緩沖液)中來純化帶GFP標(biāo)簽的融合蛋白?
理論上來說GFP-Trap®在苛刻的緩沖液體系(例如含有0.1% SDS或者1M尿素的RIPA )中恨穩(wěn)定。
洗脫的GFP-結(jié)合蛋白是否會與lg二抗發(fā)生交叉反應(yīng)?
GFP-Trap®申的結(jié)合蛋白與山羊、小鼠、大鼠或者人的抗體沒有任何同源性,所以不會與lg二抗發(fā)生非特異性交叉反應(yīng)。
GFP-Trap®的載量如何?
通常 GFP-Trap® Agarose 和 GFP-Trap® Magnetic Agarose 每 10 卩 L 懸浮液可以結(jié)合 8 卩 g GFP, GFP-Trap® Dynabeads 每 10 卩 L 懸浮液可以結(jié)合1 pgGFPo
Myc-Trap是否識別內(nèi)源性的c-Myc蛋白?
我們尚未發(fā)現(xiàn)Myc-Trap可以識別內(nèi)源性的c-Myc蛋白。由于在c-Myc蛋白的三維結(jié)構(gòu)申對于結(jié)合Myc-Trap至關(guān)重要的一些抗 原表位被隱藏了,所以在非變性條件下a-Myc蛋白很難被Myc-Trap識別到。
如何將帶Myc標(biāo)簽的融合蛋白從Myc-Trap上溫和的洗脫下來?
可以用lx或者2x Myc-peptide競爭性的洗脫。替代性的也可以用8M尿素或者pH2.5的0.2M甘氨酸室溫下洗脫。
Spot標(biāo)簽該構(gòu)建到目的蛋白N端還是C端?能否將Spot標(biāo)簽插入到目的蛋白中間?
N端或者C端都能夠很好的識別。
對于Spot標(biāo)簽插入到目的蛋白中間的得視情況而定。Spot標(biāo)簽多肽需要以線性形式存在而且目的蛋白需要易進(jìn)入不能有空間阻 礙。需要插入到足鋸大且無結(jié)構(gòu)的環(huán),或無固有結(jié)構(gòu)的區(qū)域或較長的linker,才能鋸被Spot標(biāo)簽抗體識別。
在還原狀態(tài)下該如何將帶Spot標(biāo)簽的融合蛋白洗脫下來?
可以用Spot標(biāo)簽多肽競爭性的洗脫,或者也可以用pH 1210mM NaOH洗脫(洗脫之后需立即調(diào)整pH )。